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层析柱详细的操作方法是怎样的?层析柱是凝胶层析技术中的主体,一般用玻璃管或**玻璃管。根据样品混合物中各组分在固定相和流动相中分配系数不同,从而分离的一种层析法。层析柱的直径大小不影响分离度,样品用量大,可加大柱的直径,一般制备用凝胶柱,直径大于2厘米,但在加样时应将样品均匀分布于凝胶柱床面上。离子交换层析 离子交换层析是在以离子交换剂为固定相,液体为流动相的系统中进行的。离子交换剂是由基质、电荷基团和反离子构成的。离子交换剂与水溶液中离子或离子化合物的反应主要以离子交换方式进行,或借助离子交换剂上电荷基团对溶液中离子或离子化合物的吸附作用进行。
柱层析技术
干法装柱则是直接往柱子里填入硅胶,然后再轻轻敲打柱子两侧,至硅胶界面不再下降为止,然后再填入硅胶至合适高度,再用油泵直接抽,这样就会使得柱子装的很结实。接着是用淋洗剂'走柱子',一般淋洗剂是采用TLC分析得到的展开剂的比例再稀释一倍后的溶剂。通常上面加压,下面再用油泵抽,这样可以加快速度。干法装柱较方便,但的缺陷在于'走柱子'时,由于溶剂和硅胶之间的吸附放热(可以用手摸柱子明显感觉到),容易产生气泡,这一点在使用低沸点的淋洗剂时如,更为明显。虽然产生的气泡在加压的情况下不易察觉,但是,树脂柱价格,一旦撤去压力,如在上样、加溶剂等操作的时候,树脂柱,气泡就会释放出来,严重时,整个柱子变花,样品不可能平整地通过,当然也就谈不上分离了。解决的办法是:、硅胶一定要天结实;第二、一定要用较多的溶剂'走柱子',一定要到柱子的下端不再发烫,恢复到室温后再撤去压力。
这样的好处是展开后可以清楚地看见每个点的位置,把A这个点展开后的各个层份的点与B,树脂柱多少钱,C,等原料比较,从而判断原料消失没有,点混合点X的目的在于,方便观察,因为有时候,板展开后,各点的位置有些变形,或者由于边缘效应等等,使得判断不易。
利用TLC判断物质的纯度时,往往要和NMR相结合,因为某种样品在这种展开剂中只显示一个点,并不等于在别的展开剂中也只显示一个点。但有趣的是,由于H NMR可鉴别的纯度也就在95%左右,有时候H NMR现示较纯的东西,一点板就会发现有几个点。所以,两者要结合使用。但是自己以前的样品,则可以只通过点板来判断纯度。